Методические указания лабораторная диагностика бешенства
УТВЕРЖДЕНЫ 27 февраля
1970 г., б/н
1. Диагноз на бешенство
ставят на основании комплекса эпизоотологических, клинических,
патологоанатомических данных и главным образом — на основании
лабораторных исследований.
2. Для исследования
направляют в лабораторию с нарочным: свежий труп или голову от
собаки (кошки, лисицы, песца, овцы, теленка и др.), от крупных
животных — голову или головной мозг (свежий или консервированный в
30…50%-ном растворе глицерина). Для серологических исследований
пригоден только неконсервированный мозг.
3. Лабораторная
диагностика бешенства заключается в микроскопическом исследовании
головного мозга (с целью обнаружения телец Бабеша-Негри),
серологическом (обнаружение специфического рабического антигена), а
также в постановке биологической пробы на белых мышах или
кроликах.
Порядок исследований
4. Из головного мозга,
поступившего для исследования, делают сначала засев на питательные
среды. Часть мозга сразу же помещают в холодильник и сохраняют на
случай необходимости повторного исследования. Из оставшейся части
мозга берут материал для микроскопического исследования,
серологических реакций и биологической пробы.
Примечание. Вскрытие
трупа, изъятие мозга и другие работы проводят в стерильных условиях
при строгом соблюдении мер личной профилактики (прочная фиксация
головы животного, защита рук двумя парами перчаток: хирургическими
и анатомическими; для защиты глаз надевают очки, а нос и рот
закрывают марлевой повязкой).
I.
МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
5. Для микроскопического
исследования делают отпечатки и мазки из разных участков головного
мозга.
6. Для приготовления
отпечатка кусочки головного мозга (аммонов рог, кора полушарий,
мозжечок, продолговатый мозг) кладут на фильтровальную бумагу,
сложенную в 4…6 слоев. К поверхности среза несколько раз (3…4)
подряд прикасаются чистым предметным стеклом, слегка надавливая,
чтобы на стекле получился тонкий отпечаток.
7. Мазки делают из тех же
участков головного мозга. Для этого кусочки мозга растирают в
фарфоровой ступке пестиком или в пробирке стеклянной палочкой до
образования гомогенной массы, из которой делают грубые мазки на
обезжиренном предметном стекле.
Можно делать мазки и
другим способом. Для этого небольшой кусочек мозга кладут на край
предметного стекла, а другим стеклом раздавливают его и размазывают
от одного края до другого, в результате чего на поверхности стекла
получается тонкий равномерный мазок.
8. Полученные мазки или
отпечатки окрашивают одним из следующих способов:
а) окраска по Муромцеву.
Изготовленные, еще влажные мазки или отпечатки сразу же фиксируют в
этиловом или метиловом спирте или в смеси спирта пополам с эфиром
или ацетоном (химически чистым) в течение 1…2 ч и после этого
промывают водой. Сосуд с фиксатором должен быть хорошо закрыт,
чтобы предупредить испарение фиксирующей жидкости. После промывания
водой влажные мазки помещают на 5..10 мин в раствор краски Мансона,
разведенной водой 1:40. Затем краску сливают и тут же мазки
погружают в 10%-ный водный раствор танина на 8…10 мин до
появления голубоватой окраски. После этого мазки промывают водой,
высушивают фильтровальной бумагой, проводят через смесь из равных
частей спирта с ацетоном (химически чистым) или спирта с ксилолом и
снова высушивают фильтровальной бумагой. Окрашенный мазок должен
иметь светло-голубой фон, при этом ядра нервных клеток окрашиваются
в синий цвет, а тельца Бабеша-Негри — в бледно-фиолетовый с темными
включениями;
б) окраска по Селлерсу.
На приготовленный влажный отпечаток или мазок наносят на 4…5 с
смесь реактива «А» (метиленовый синий — 2 г, метиловый спирт без
ацетона — 100 мл) и реактива «Б» (основной фуксин — 0,5 г, этиловый
спирт без следов ацетона — 100 мл). Рабочий раствор красителя
состоит из 15 мл реактива «А», 2…4 мл реактива «Б» и 25 мл
метилового спирта. После окраски препарат промывают проточной водой
и высушивают. В окрашенном мазке цитоплазма нейронов ярко-синяя,
ядрышки темно-синие, эритроциты кирпично-красные, тельца
Бабеша-Негри пурпурно-красные с отчетливо видной базофильной
структурой телец;
в) окраска по Михину.
Мазки или отпечатки фиксируют в смеси спирта и эфира (поровну) в
течение 5…10 мин, после чего их просушивают фильтровальной
бумагой и окрашивают в течение 30…40 мин краской Гимза (1…2
капли на 1 мл дистиллированной воды), быстро промывают подкисленным
спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 96°-ного
спирта), а затем водой, просушивают фильтровальной бумагой и
подвергают исследованию. Если материал был в глицерине, то его
предварительно хорошо прополаскивают в воде и просушивают
фильтровальной бумагой.
В
окрашенном препарате при микроскопическом исследовании основной фон
должен быть красным с фиолетовым оттенком. При преобладании синего
тона мазок снова обмывают подкисленным спиртом и промывают водой.
Пирамидальные нервные клетки имеют синеватый цвет с интенсивно
черным ядром, а тельца Бабеша-Негри — розово-красный с точечными
включениями темно-синего цвета;
Источник
Сертификация продукции
Сертификат соответствия
Пожарный сертификат
Протокол испытаний
Строительство
Составление смет
Проектные работы
Строительные работы
Строительная экспертиза
Обследование зданий
Оценка недвижимости
Контроль качества строительства
Промышленная безопасность
Тепловизионный контроль
Ультразвуковой контроль
Георадарное сканирование
Скачать базы
Государственные стандартыСтроительная документацияТехническая документацияАвтомобильные дороги
Классификатор ISO
Мостостроение
Национальные стандарты
Строительство
Технический надзор
Ценообразование
Экология
Электроэнергия
ГОСТ 26075-2013
Животные. Методы лабораторной диагностики бешенства
| Обозначение: | ГОСТ 26075-2013 |
| Обозначение англ: | GOST 26075-2013 |
| Статус: | взамен |
| Название рус.: | Животные. Методы лабораторной диагностики бешенства |
| Название англ.: | Animals. Methods of laboratory diagnostic of rabies |
| Дата добавления в базу: | 01.10.2014 |
| Дата актуализации: | 01.02.2020 |
| Дата введения: | 01.01.2015 |
| Область применения: | Стандарт распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: — метод флуоресцирующих антител (МФА); — метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы – НГУК-1); — биопроба на белых мышах; — метод иммуноферментного анализа (ИФА); — реакция диффузионной преципитации (РДП). |
| Оглавление: | 1 Область применения 2 Нормативные ссылки 3 Термины, определения и сокращения 4 Условия выполнения исследований и требования безопасности 5 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы и животные 6 Отбор проб 7 Метод флуоресцирующих антител (МФА) 8 Метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейроблатомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы — НГУК-1) 9 Биопроба на белых мышах 10 Метод иммуноферментного анализа (ИФА) 11 Реакция диффузионной преципитации (РДП) Библиография |
| Разработан: | ФГБУ ВГНКИ |
| Утверждён: | 27.06.2013 Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации (Inter-Governmental Council on Standardization, Metrology, and Certification 57-П) 30.09.2013 Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии (1127-ст) |
| Издан: | Стандартинформ (2014 г. ) |
| Расположен в: | Техническая документация Электроэнергия ЗДРАВООХРАНЕНИЕ Ветеринария Экология ЗДРАВООХРАНЕНИЕ Ветеринария |
| Заменяет собой: |
|
| Нормативные ссылки: |
|
Источник
Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
Федеральная
служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей
и благополучия человека
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Порядок отбора, упаковки, хранения и
транспортирования биологического
материала для лабораторной диагностики
бешенства у людей, погибших от гидрофобии
Методические
указания
МУ
4.2.2839-11
Москва 2011
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере
защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г. Онищенко, Ю.В. Демина,
Н.Д. Пакскина, О.С. Хадарцев); Государственным научно-исследовательским
институтом стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.
Л.А. Тарасевича (И.В. Борисевич, А.А. Мовсесянц); Центром специальной
лабораторной диагностики и лечения особо опасных и экзотических инфекционных
заболеваний Минобороны РФ (В.П. Бондарев, В.И. Марков, С.В. Борисевич, А.Ю.
Зверев, В.А. Меркулов, М.В. Лыков, М.Н. Писцов, А.А. Петров).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной
службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,
Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 7
февраля 2011 г.
4. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей
и благополучия человека,
Главный
государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г.
Онищенко
7 февраля 2011 г.
Дата введения: с момента утверждения
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Порядок
отбора, упаковки, хранения
и транспортирования биологического материала
для лабораторной диагностики бешенства у людей,
погибших от гидрофобии
Методические
указания
МУ 4.2.2839-11
1.1. Настоящие методические указания предназначены для
патологоанатомов и судебно-медицинских экспертов, а также для специалистов
органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека, осуществляющих лабораторную диагностику
погибших от гидрофобии (бешенства) лиц, а также общее руководство по отбору,
упаковке, хранению и транспортированию секционных материалов.
1.2. В настоящих методических указаниях определены порядок отбора,
упаковки, хранения и транспортирования биологического материала от умерших
людей для проведения лабораторной диагностики заболевания, вызванного вирусом
уличного бешенства.
Авария | — нештатная ситуация, при которой |
Биологическая безопасность | — система медико-биологических, |
ЛПО | — лечебно-профилактические |
ОТ-ПЦР | — метод обратной транскрипции — |
RТ-ПЦР | — метод полимеразной цепной |
В настоящих методических указаниях использованы ссылки на
следующие нормативные документы:
Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом
благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.
Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом
нормировании, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от
24 июля 2000 г. № 554.
СП
1.3.1285-03 Санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами I —
II группы патогенности (опасности)».
СП
1.2.036-95 Санитарные правила «Порядок учета, хранения, передачи и
транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности».
МУ
1.3.1794-03 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала,
инфицированного микроорганизмами I — IV групп патогенности».
WHO Expert consultation on rabies: First
Report (2004: Geneva, Switzerland). WHO Technical Report Series 931. — 123 c.
Laboratory techniques in rabies. Fourth
edition WHO, Geneva, 1996 г.
4.1. Забор материала от умерших с подозрением на инфекцию,
вызванную вирусом уличного бешенства, и его упаковку проводит специально
обученный персонал лечебно-профилактических организаций (ЛПО) в соответствии с
требованиями действующих нормативных документов.
4.2. Доставка материала на исследование производится
лечебно-профилактической организацией по согласованию с управлением
Роспотребнадзора субъекта Российской Федерации с учетом требований
биологической безопасности и оптимальной транспортной схемы в Центр специальной
лабораторной диагностики и лечения особо опасных и экзотических инфекционных
заболеваний Минобороны Российской Федерации.
4.3. Управление Роспотребнадзора субъекта Российской
Федерации согласовывает с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека порядок доставки материала на исследование
в Центр специальной лабораторной диагностики и лечения особо опасных и
экзотических инфекционных заболеваний Минобороны Российской Федерации.
5.1. Отбор, упаковку и транспортирование секционного
материала от лиц, предположительно погибших от гидрофобии (бешенства)
осуществляет квалифицированный персонал, обученный правилам биологической
безопасности и имеющий опыт патологоанатомического или судебно-медицинского
исследования лиц, погибших от опасных и особо опасных инфекционных заболеваний,
с соблюдением правил противоэпидемического режима в соответствии с СП
1.3.1285-03.
5.2. Во избежание заражения в процессе вскрытия необходимо
соблюдать все меры предосторожности, включая тщательность препарирования и
использование толстых резиновых перчаток.
5.3. Для исследования забирают следующие участки головного
мозга:
• аммонов рог;
• мозжечок;
• кора больших полушарий.
Исследованию подвергаются также слюнные железы.
Размер секционного материала 15 мм×15 мм.
5.4. Забор производят стерильными инструментами в стерильные
одноразовые пластиковые флаконы с закручивающимися крышками (колбы,
контейнеры), содержащие физиологический раствор, покрывающий взятый секционный
материал.
5.5. От одного умершего от гидрофобии (бешенства) человека
отбирают две пробы: одну пробу для исследования материала молекулярно-биологическими
методами (ОТ-ПЦР или RT-ПЦР), вторую — для проведения вирусологического
исследования. Вся работа по отбору проб должна проводиться в соответствии с
требованиями биологической безопасности с соблюдением противоэпидемического
режима.
5.6. Каждый образец материала помещают в отдельную
транспортную емкость.
5.7. Отобранный секционный материал помещают в стерильные
пластиковые флаконы (колбы, контейнеры), содержащие физиологический раствор и
подвергают глубокой заморозке до минус (65 ± 5) °С (или в жидком азоте) либо до
минус (20 ± 4) °С. В исключительном случае допускается помещение секционного
материала вместе с глицерином в стерильные пластиковые флаконы (колбы,
контейнеры) при температуре (6 ± 2) °С.
5.8. Запрещается помещать и хранить секционный биологический
материал в формалине, а также в парафиновых блоках.
6.1. Отобранный секционный материал до упаковки образца для
транспортирования может храниться при следующих условиях:
• при температуре минус (65 ± 5) °С (или в жидком азоте) —
длительно;
• при температуре минус (20 ± 4) °С — в течение 30 суток с
момента отбора материала;
• при температуре (6 ± 2) °С — не более 3 суток с момента
отбора материала.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание
материала.
6.2. Все образцы, доставляемые в диагностическую
лабораторию, должны быть герметично упакованы в соответствии с действующими
нормативно-методическими документами:
• в транспортную емкость (плотно закрывающиеся стерильные
пластмассовые колбы либо флаконы (контейнеры) с завинчивающимися крышками,
проверенные на герметичность); плотно закрытый верхний конец транспортной
емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин,
парафильм и др.); емкость маркируют;
• в плотный полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой
(или другим гигроскопичным материалом) в количестве достаточном для адсорбции
всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично
заклеить или запаять.
6.2.1. В отдельный полиэтиленовый пакет вкладывают бланк
направления с указанием: наименование направляющего учреждения, ФИО больного,
возраст, место жительства, предварительный диагноз, эпидемиологический анамнез,
вид материала, дата и время взятия материала.
6.2.2. Пакеты с образцами от одного пациента вместе с
направлением упаковывают во второй плотный полиэтиленовый пакет. Не допускается
упаковывание образцов материалов от разных людей в один и тот же пакет.
7.1. Перед непосредственным транспортированием герметично
закрытые полиэтиленовые пакеты достают из низкотемпературного холодильника и
помещают в термоизолирующий плотно закрывающийся контейнер (термос либо
сумка-холодильник), приспособленный для транспортирования биологических
материалов.
7.1.1. Охлаждающие элементы перед транспортированием
секционного материала необходимо замораживать при температуре минус (65 ± 5) °С
в течение (6 ± 2) часов, а при температуре минус (20 ± 4) °С — в течение (20 ±
2) часов.
7.1.2. В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие
элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса
прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования,
названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб
клинического материала указаны в приложении.
7.2. Транспортирование секционного материала в
диагностическую лабораторию осуществляется нарочным(и), информированным о
правилах доставки материала в соответствии с п. 3.4 СП
1.2.036-95.
8.1. Вскрытие проводят в дополнительном комплекте
специальной одежды, включающим: противочумный комплект, фартук, защитные очки
или защитный щиток, средства индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор
типа ШБ-1 или РБ, Лепесток-200), двойные резиновые перчатки. После процедуры
отбора материала перчатки обрабатываются растворами дезинфицирующих средств,
руки после снятия перчаток обрабатываются антисептиками.
8.2. Лечебно-профилактические организации, осуществляющие
патологоанатомическое исследование лиц, предположительно погибших от гидрофобии
(бешенства), должны быть оборудованы аптечкой, укомплектованной в соответствии
с СП
1.3.1285-03, и дополненной антирабической вакциной и антирабическим
иммуноглобулином.
В случае возникшей аварийной ситуации, вызванной
повреждением кожных покровов, проводится местная обработка раны
дезинфектантами, а затем немедленно должен быть начат курс
лечебно-профилактической иммунизации в соответствии с действующей «Инструкцией
по применению вакцины антирабической культуральной концентрированной очищенной
инактивированной сухой, лиофилизата для приготовления раствора для
внутримышечного введения и антирабического иммуноглобулина».
8.3. Режимы обеззараживания различных объектов (медицинских
инструментов и др.) соблюдаются в соответствии с СП
1.3.1285-03.
8.4. Обеззараживание поверхностей помещения (пол, стены,
двери), оборудования, рабочих столов и др. проводится двукратным протиранием с
интервалом в 15 мин 6 %-м раствором перекиси водорода либо любым
дезинфицирующим средством, обладающим вирулицидной активностью, с последующей
обработкой ультрафиолетом в течение 60 мин.
8.5. Каждая нештатная ситуация (авария) регистрируется в
журнале аварийных ситуаций, где отмечается: дата, время, место, характер
аварии, локализация травмы или контакт, фамилия, имя и отчество лиц, имевших
контакт с вирусом уличного бешенства.
(обязательное)
Способы взятия, условия хранения и транспортирования
секционного материала для лабораторной диагностики бешенства
Секционный | |
Сбор материала | В качестве секционного материала |
Условия хранения материала | При температуре минус (65 ± 5) °С При температуре минус (20 ± 4) °С — При температуре (6 ± 2) °С — не Допускается только однократное замораживание-оттаивание Не допускается хранение материала в |
Условия транспортирования материала | В термоконтейнере с охлаждающими — (6 ± 2) °С — минус (20 — минус (65 |
Источник